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液相色谱柱的使用与维护

更新时间:2017-09-07      点击次数:2039
  
  液相色谱柱的使用与维护
 
  液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术,是现代分离测定的重要手段。问世以来,因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂,缓冲液等活动相泵进装有固定相的色谱柱,经进样阀注进待测样品,由活动相带进柱内,在柱内各成分被分离后依次进进检测器,色谱信号由记录仪、积分仪或色谱工作站记录。
 
  色谱柱是液相色谱的心脏,在液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性,延长柱子的使用寿命非常重要。因此对液相色谱柱的维护是关键。
 
  1 色谱柱的构造
 
  色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,压力不高于70㎏/㎝2时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为进步柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。色谱柱两真个柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钦合金,孔径0.2-20 μm(5-10μm),取决于填料粒度,目的是防止填料漏出。
 
  色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类,尺寸规格也不同:
 
  (I)常规分析柱(常量柱),内径2-5mm(常用4.6mm,国内有4mm和5mm ),柱长10-30cm ;
 
  (2)窄径柱,又称细管径柱、半微柱,内径1 -2mm ,柱长10-20cm;
 
  (3)毛细管柱(又称微柱),内径0.2-0.5mm;
 
  (4)半制备柱,内径>5mm;
 
  (5)实验室制备柱,内径20-40rnm,柱长10-30cm;
 
  (6)生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定,目的是为了避免管壁效应。
 
  2色谱柱的使用和维护
 
  在日常分离分析工作中,色谱柱的正确使用和维护十分重要,色谱柱使用是否得当,直接影响色谱柱的寿命,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操纵过程中,需要留意下列题目,以维护色谱柱。
 
  (1)柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。
 
  (2)假如仪器用来做常规分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常规分析配置一根柱,这样有助于延长柱子的寿命。
 
  (3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的忽然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的忽然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
 
  (4)应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
 
  (5)如使用柱温控制装置时,应留意在通人活动相后才能升温。
 
  (6)一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除往留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
 
  (7)选择使用适宜的活动相,以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使活动相在进进分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
 
  8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
 
  (9)经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保存在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中活动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种活动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50-75mL。
 
  (10)保存色谱柱时应将柱内布满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。尽对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
 
  (11)色谱柱使用过程中,假如压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内,使柱头被污染;假如柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
 
 
 

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